D-Plex RNA-seqテクノロジー

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RNA2018
D-Plex RNA-seq テクノロジー

NGSライブラリー調製
✔ Total RNA
✔ mRNA
✔ small non-coding RNA
✔ miRNA

D-Plexテクノロジーとは

D-PlexテクノロジーはRNA-seqのライブラリー調製における新しいイノベーションです。

D-PlexはIllumina社やMGI社の次世代シーケンシングのフォーマットに最適化されたRNA-seqのライブラリー調製テクノロジーです。

D-Plex RNA-seqテクノロジーの特徴

  • 少量~極少量インプットサンプルから再現性の高い解析結果

  • 複雑性の高いライブラリーから新規・多様な転写産物を検出

  • FFPEやリキッドバイオプシーなど難しいサンプルに威力を発揮

Aテーリング+テンプレートスイッチング

テーリングテンプレートスイッチングを駆使したライゲーションフリーの工程により、10 pgのsmall RNAや100 pgのtotal RNAなどの極少量インプットサンプルから高い感度でRNA-seqを実施できます。

図:ポリアデニル化したRNAを3'アダプターを付加したプライマーで逆転写します。テンプレートスイッチングオリゴにより、逆転写産物に直接5'アダプターを付加することが可能です。

次世代シーケンスによる配列決定結果とマイクロアレイ・qPCR・ノーザンの結果が一致しないケースが指摘されていますが、その原因の一つとして指摘されているのがライゲーションバイアスです。

特にRNAリガーゼは、ターゲットの配列や高次構造に依存してコンカテマーや環化が生じるなど、最終生成物量にバイアスが生じることが報告されています。

アダプターの導入にテーリングとテンプレートスイッチングを併用することによって、リガーゼに起因する問題を回避し、より実際の転写量を反映した結果を高感度に得ることができます。

また、D-Plexテクノロジーのソリューションは、細胞株から新鮮組織、ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)サンプル、リキッドバイオプシーなど、幅広い種類のサンプルに対し検証を行い、対応できることを確認しております。

臨床検体など微量のインプットからRNA-seqを実施する際に威力を発揮します。

Unique Molecular Identifier (UMI)

Unique Molecular Identifier (UMI)はテンプレートスイッチングオリゴに導入された固有の分子識別子で、PCRによる増幅バイアスを除去でき、複雑性の高いライブラリーが得られるため、幅広いRNA種のライブラリーから新規かつ多様なトランスクリプトの検出を行うことが可能になります。

D-Plex for IlluminaテクノロジーではUMIを導入しており、これにより効果的にバイアスが除去され、リードのカウントの正確性が向上するため、少量のサンプルからでも信頼性の高いトランスクリプトの定量結果が得られます。

RNA-seqライブラリー調製キット

新しいD-Plex RNA-seqキットラインアップは、全行程シングルチューブでの作業により、作業効率、信頼性と再現性が向上します。合理化されたワークフローで分かりやすいプロトコールを提供しています。

D-Plex RNA-seq テクノロジー
キットのワークフロー
step1
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step2b
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step3c
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step6
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D-Plex RNA-seqキットは、工程を1日以内に完了することができ、最小限のハンズオン時間で実施可能なプロトコールを提供します。

ライブラリーの調製はシングルチューブで行われるため、効率、信頼性と再現性が大幅に向上します。

FFPE由来のサンプルを含め、インタクトなRNAサンプルと分解されたRNAサンプルからのライブラリー調製について検証済みのキットとなっています。

D-Plex RNA-seq kitラインアップ

Diagenodeでは、D-Plexテクノロジーを搭載したRNA-seqライブラリー調製キットを目的の分子種・使用シーケンシングテクノロジーに合わせてご用意しております。

以下のチャートで目的別に適合キットを紹介いたしますので、是非グローバルサイトで製品詳細をご確認ください。

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D-Plex mRNA-seq Kit

トランスクリプトームの全コーディング部分を網羅的にライブラリー化することが可能なNGSライブラリー調製キットです。


(近日発売予定)

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D-Plex Small RNA-seq Kit

miRNAを含む多様なSmall RNA種をライブラリー化することが可能なNGSライブラリー調製キットです。

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D-Plex Total RNA-seq Kit

コーディング・ノンコーディング全てのトランスクリプトームを網羅的にライブラリー化することが可能なNGSライブラリー調製キットです。

(近日発売予定)

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D-Plex Small RNA DNBSEQ™ Kit

MGS社製次世代シーケンシングテクノロジーに適合したRNA-seqライブラリー調製キットです。miRNAを含む多様なSmall RNA種をライブラリー化することが可能です。

D-Plex 24 Single Indexes for Illumina

D-Plex small RNA-seq kitを用いて多検体のマルチプレックス化を行う際に使用するシングルインデックスです。Illumina社製シーケンサーでシーケンスをマルチプレックス化する際に使用していただけます。

D-Plex Unique Dual Indexes for Illumina

Illuminaシーケンシングテクノロジーにご使用いただけるユニークデュアルインデックスです。インデックスホッピングによるエラーを除去、正確なデータが得られるマルチプレックス用インデックスプライマーです。

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