Total RNA-seqは全トランスクリプトームを探索することで潜在的な転写調節のメカニズムについての洞察が得られる手法です。
Total RNA-seqサービスではトランスクリプトーム全体の配列を決定し、特定の状況下で生物学的サンプルに存在するmRNAやlong non-coding RNAを含む完全なRNAのセットを記録することができます。
mRNA-seqは、特定の環境下で生物学的サンプルに存在するコーディングRNAを効率的に検出し、正確に定量するために選択される方法です。
転写物の存在量を正確に推定することで、発現変動解析が可能になります。
お客様のご注文後、サンプル送付から処理、データ取得、解析を包括的にサポートします。
サービスの特徴
2つのオプションを提供します
Total RNA-seq
・rRNAの除去を実施後、コーディング/ノンコーディングRNAの検出
・クロマチンリモデリング/転写・転写後調節に関わるnon-coding RNAの検出
・多様なサンプル量に対応します
・新規転写産物や新規スプライシングイベントの検出
・FFPEサンプルにも対応しています
mRNA-seq
・Library complexityを重視し、転写産物を高いカバレッジで検出します
・遺伝子発現レベルの正確な比較が可能です
・多様なサンプル量に対応します
Total RNA-seq (lncRNAを含む全トランスクリプトーム解析)
コーディング・ノンコーディングRNAを含むライブラリーを作成してシーケンスします。lncRNAの解析を通じて遺伝子構造・転写後発現調節・クロマチンリモデリングなど幅広い研究にご利用いただけます。
Web Link:https://www.diagenode.com/en/p/rna-seq-services (グローバルサイト)
Step 1: RNA品質チェック
• RIN value (RNA integration number) 測定
• RNA濃度測定
Step 2: ライブラリー調製
• rRNA除去
• ストランド特異的にライブラリー調製を実施
• シーケンシング前にライブラリーチェック実施
Step 3: シーケンシング(Illumina社プラットフォーム使用)
• PE50、1サンプル当たり約5000万raw read 取得
mRNA-seq
polyA選択されたRNAを含むライブラリーを調製してシーケンスする手法です。幅広いインプット量に対応します。
Step 1: RNA品質チェック
• RIN value (RNA integration number) 測定
• RNA濃度測定
Step 2: ライブラリー調製
• PolyAセレクションによるmRNA精製
• ストランド特異的にライブラリー調製を実施
• シーケンシング前にライブラリーチェック実施
Step 3: シーケンシング(Illumina社プラットフォーム使用)
• PE50、1サンプル当たり2500-3000万raw read 取得
バイオインフォマティクス解析
多彩な追加解析オプションを取り揃えています。
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スタンダード解析
リファレンスゲノムへのアラインメント、トランスクリプトーム発現量算出
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アドバンス解析
・示差解析 ・示差遺伝子のアノテーション ・主成分分析 ・GO解析 ・パスウェイ解析
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解析のカスタマイズ
マルチオミクス解析、機械学習解析など上記にない解析法をご希望の場合は弊社営業担当者にご相談ください。
FAQ
本受託解析サービスでの必要RNA量は以下の通りです。
- Total RNA-seq: 最少5 ng以上のTotal RNA(植物由来の場合は100ng)をお送りください。
- mRNA-seq: 最少10 ng以上のTotal RNA(植物由来の場合は100ng)をお送りください。
結果を最大化するため、RNA調製とサンプル送付に関するガイドライン (別紙「サンプル調製・送付ガイドライン」)を厳守してください。
オーダーは最低9サンプルより承っており、正確な実験結果を得るため、反復実験の数をご依頼になるサンプルの数に含めてください。1試験条件あたり最小3回以上の反復実験を実施することを推奨しております。
本受託解析サービスでは以下の生物種について解析いたします。
miRNA、sncRNA、mRNA:真核生物
lncRNA (Total RNA-seq):ヒト・マウス・ラットのみ
ご希望の方はRNA抽出をご依頼の旨、お問い合わせ時にお申し出ください。
サンプルの種類を明確にお知らせください。受入を実施するサンプルの種類は凍結細胞ペレット・凍結組織・精製total RNA・FFPEです。
FFPEはlncRNA (total RNA)でのみ受け付けます(mRNA-seqを実施することはできません)。
分析したい分子種に応じたシーケンシングができるのはもちろんですが、基本的なmRNAの発現解析、深度を上げた少量転写産物の解析、新規RNA分子種の発見など目的を絞ってご依頼ください。
本受託解析ではスタンダード解析とアドバンスト解析2種のバイオインフォマティクス解析をご利用いただけます。
スタンダード解析
・リファレンス配列へのアラインメントと発現量算出
アドバンスト解析
スタンダード解析に加えて
・発現量比較解析
・Unsupervised analysis (クラスタリング・主成分解析)
・Gene Ontology (GO解析)and/or Pathway Enrichment Analysis of differential expressed genes
・機械学習(大きなデータセット・データ統合に最適)
をご選択いただけます。
その他、特殊な解析をご希望のお客様には、弊社バイオインフォマティクスチームがカスタムで解析パイプラインを追加いたします。
マルチオミクスのプロジェクトで、複数の実験結果を統合したい(例えばWGBSとRNA-seqのデータを統合したい場合など)ケースも対応可能ですので、ご相談ください。
料金は
スタンダード解析は1注文あたり1セットアップ費 +サンプル当たりの解析費
アドバンスト解析の場合は1注文あたり1セットアップ費 +1群間比較あたりの解析費
となっております。
弊社で推奨している各解析の推奨取得リード数は以下の通りです。
・miRNA、sncRNAの解析:10-20M reads
・mRNAの解析:25-30M reads
・lncRNAの解析:45-50M reads
サービスの流れ
DiagenodeのRNA-seq受託解析サービスでは、お客様が抽出したtotal RNAサンプルをお預かりし、Diagenodeの専門チームによる処理および解析を行って結果をお知らせします。
以下にサービスの流れを簡単にご説明いたします。
1. お問い合わせ・お見積り
お見積りをご希望の方は、下のリンク「お見積リクエストフォーム」をクリックして、お客様のサンプルについての情報をご入力ください。
送付いただきました情報を基にお見積を作成し、弊社営業担当者より折り返しお見積と解析結果見本をお送りいたします。
正式なお見積は弊社営業担当者、またはご利用の代理店を通してお手元にお届けいたします。
お見積りとともに「Biosafety form」をお送りいたします。サンプル調製・送付ガイドラインでサンプルの受託条件をご確認いただき、サンプルの情報をご記入の上、ご注文前にご返送いただきますようお願いいたします(輸出可否の確認をさせていただきます)。
海外のラボで分析を行います関係上、輸出規制に該当する品目を含むサンプルについてはご相談させていただく場合がございます。
必要に応じて、秘密保持契約・業務委託契約を締結することも可能です。
サンプル調製・送付ガイドライン及びBiosafety formは下のリンクからダウンロードしていただくことも可能です。
・サンプル調製・送付ガイドラインは “必ず” ご一読ください。
・“サンプル調製・送付ガイドライン“ に従っていないサンプルを提出された場合、追加料金が発生する可能性がございます。
mRNA-seq/ total RNA-seq
②サンプル調製ガイドライン
③サンプル送付ガイドライン
④Biosafety form
サービスの詳細や、その他のお問い合わせについて(資料請求、秘密保持契約の締結など)は、下リンクよりDiagenode SAグローバルサイト上の「お見積りボタン」をクリックしてお問い合わせください。
2. 注文書送付
受託解析をご依頼される際は注文書を弊社に直接、あるいは代理店を通してお送りいただきます。
注文を弊社で受領した段階で次の書類をお送りいたしますので、必要な情報をご記入の上、ご返送ください。
・サンプルIDシート
返送いただきましたら弊社で確認の上、分析するサンプルを送付していただくスケジュールを調整・ご連絡させていただきます。
3. サンプル送付
サンプル送付日が決定いたしましたら、サンプル調製・送付ガイドラインに従ってRNA / 細胞サンプルをご準備いただき、弊社にお送りください。
弊社で確認後、Diagenode SAにサンプルを送らせていただきます。
4. 解析作業
Diagenode SAで実施する作業は以下の通りです。
・サンプルの品質管理(オプション)
RINとRNA濃度の決定を行います。サンプルに不備があった場合はこの段階で追加のサンプル提供についてご相談させていただきます。
・polyA RNA精製とrRNA除去
・ストランド化・マルチプレックスライブラリーの調製
・ライブラリーの品質管理
・Illuminaプラットフォーム上での次世代シーケンシング
・バイオインフォマティクスに基づく解析(オプション)
5. 納品物送付
オプションで追加される解析結果データの納品はDiagenode SAから直接お客様に電子メールでお送りいたします。容量の大きいファイルのダウンロードについてはftpサーバーよりダウンロードしていただく形になります。
詳しくはグローバルサイトをご覧いただくか、下のお問い合わせボタンをクリックしてお問い合わせフォームにご入力ください。弊社営業員が折り返しご連絡申し上げます。
ダイアジェノードポータルサイト(diagenode.co.jp)に掲載のサービス情報は、実際のサービス内容と異なる場合があります。情報の更新がある場合、お問い合わせ時に詳しくご案内させていただきます。
エピジェネティクス受託解析サービス
DiagenodeではRNA-seqの他にも多くのエピジェネティクス関連受託サービスを承っております。下のページにてご紹介しておりますので、ご希望の解析に応じてご検討ください。